Методика лабораторного разведения гамазовых клещей

Описанию методики лабораторного разведения гамазовых клещей посвящены лишь немногие статьи, в то время как эти сведения чрезвычайно важны для выяснения роли отдельных видов гамазид в передаче различных заболеваний, а также для изучения биологии клещей.

Для разведения постоянных паразитов, проводящих всю жизнь на хозяине, и для разведения временных, обычно долго не задерживающихся на хозяине, паразитов применяются различные методы. Общим условием, успешного развития клещей, независимо от способа их разведения, является поддержание достаточной влажности; сухость губит клещей, обычно ведущих скрытый образ жизни.

Для разведения полосатого трупного клеща (Poecilochirus necrophori Vitzth.) употребляются чашки Петри, выложенные внутри фильтровальной бумагой (Neumann, 1943). В чашки помещаются жуки-мертвоеды, на которых находятся дейтонимфы клещей, и пища для них - свежие разорванные личинки мух, кусочки дождевых червей и проч. Весь цикл развития проходит в чашке Петри. Клещей можно помещать в чашки и без жуков. Пищу необходимо менять ежедневно.

Один из способов разведения паразитических клещей заключается в следующем (Нельзина, 1951). Химическая пробирка на ¹/₄ наполняется дестил- лированной водой. Затем в пробирку вдвигается до уровня воды плотный увлажненный ватный тампон, поверх которого насыпается слой мелкого прокаленного песка (0.5 - 1 см), поглощающего лишнюю влагу в пробирке. Сверху на песок кладется несколько кружочков фильтровальной бумаги,, вырезанных по размеру пробирки и плотно входящих в нее, чтобы при всяких манипуляциях с клещами (выборка клещей для кормления, пересадка их в новую пробирку и т. п.) песок не высыпался из пробирки. Кроме того, в пробирку помещается перегнутая посредине полоска фильтровальной бумаги так, чтобы она находилась в верхней половине пробирки и не смачивалась. Затем при одиночном воспитании в пробирку помещается один клещ, а при массовом - несколько десятков их (но не свыше 50 особей), и пробирка затыкается очень тугим гладким ватным тампоном. Снаружи на пробирку приклеивается номер, соответствующий номеру записи в дневнике. В пробирках из чистого прозрачного стекла удобно вести наблюдения непосредственно через стенки, рассматривая клещей с помощью ручной лупы с двадцатикратным увеличением.

Пробирки вертикально устанавливаются в устойчивую банку или специальный штатив и помещаются в термостат.

Недостатком этого метода является то, что клещи могут находиться в одной и той же пробирке не больше одного месяца, так как в пробирке остается мало воды и, кроме того, появляется плесень.

Модификацией этого способа является содержание клещей во влажных камерах, предложенное Скоттом (Scott, 1952). В невысокую широкогорлую банку наливают немного воды или, - что гораздо удобнее, - кладут на дно слой влажной смеси гипса и толченого угля. Затем берут стеклянную трубку длиной 10 см и шириной 2 см, один конец которой затягивают кусочком очень частого мельничного газа, закрепляя его на трубке толстым резиновым кольцом. Диаметр трубки с надетым кольцом должен соответствовать диаметру горла банки, так, чтобы трубку можно было воткнуть как пробку. Трубка служит для содержания клещей, а банка - для поддержания влажности.

Клещей переносят в трубку либо кисточкой, либо используя трубку как эксгаустер. Для этого верхний открытый конец трубки временно затыкают пробкой с вставленной в нее узкой стеклянной трубочкой, а через противоположный конец, затянутый газом, втягивают воздух. Насосав таким образом достаточное количество клещей в трубку, их стряхивают щелчком по трубке на дно, а затем, вынув пробку с трубочкой, закрывают верхний конец трубки кусочком целлофана и закрепляют его резиновым кольцом.

Влажную камеру нужно держать в термостате при постоянной температуре.

Другой способ разведения в искусственных гнездах (Williams, 1946) пригоден для одновременного получения большого количества живых клещей. В искусственном гнезде следует поддерживать влажность около 90% (и не ниже 70%). Животное помещают в маленькую клетку из металлической луженой сетки с сантиметровыми ячейками. Клетку ставят в ящик, на дно которого насыпана земля (сантиметра на 3), положено несколько слоев газетной бумаги и сверху солома. Земля хорошо впитывает мочу животного, вредную для клещей, в соломе они находят для себя укрытие. Применение травы или стружек вместо соломы значительно хуже, так как трава очень быстро сваливается в комок и задерживает мочу. Более жесткая солома сваливается не так быстро и скорее высыхает. Животное не рекомендуется поить, а вместо этого следует давать ему сочный корм.

Для предохранения от расползания клещей края ящика с внутренней стороны намазывают вазелином, а ящик ставят на металлический поднос, имеющий по краю желобок, заполненный автомобильным смазочным маслом.

Клещи в гнездах размножаются быстро. Так, в опыте с воспитанием крысиного клеща вместо 32 клещей, выпущенных на двух крыс, через 2 недели их стало по меньшей мере 1000.

На методе устройства искусственного гнезда основано и устройство "заводов", применявшихся Земской (1954б) для массового разведения крысиного клеща. На дно высокой широкогорлой 10-литровой банки кладут 10 - 15 слоев фильтровальной бумаги, прокладывав их 2 - 3 кусками хлопчатой, или, лучше, шерстяной ткани (фетр, сукно, драп), вырезанных по форме и размеру банки. В шерсти клещи охотно прячутся. Поверх этой многослойной подстилки на кусок шерстяной ткани ставят два квадратных ящичка, вдвинутых один в другой (размеры их 10х12 и 9х11 см). Между стенками ящиков прокладывают кусочки шерстяной ткани. Одна сторона оставляется открытой, чтобы в этот "домик" могла забегать мышь. На домик сверху ставят фанерную пирамидку со срезанной верхушкой, внутрь которой кладут вату или шерстяные тряпочки, где также скопляются клещи.

В банку впускают 10 - 30 клещей и мышь, предварительно надев ей воротник диаметром 4.4 - 4.8 см из кино- или рентгенопленки, который препятствует счесыванию и поеданию клещей. Мышь обычно находится в фанерном домике, где клещи в массе нападают на нее. Корма для мыши нужно класть понемногу, чтобы излишне не загрязнять завод. Для увлажнения в банку подвешивают на шнуре химическую пробирку с водой, закрытую ватным тампоном. Сильно загрязненную банку чистят следующим образом. В заранее подготовленную вторую банку переносят домик с мышью, а все содержимое первой банки складывают в мешочек и туго завязывают. Постепенно голодные клещи переползают на мешочек, из которого их выбирают кисточкой при осмотрах в течение 10 дней.

Чтобы клещи не расползались из банки, ее ставят на поднос с водой, а наружные края ее обмазывают тонким слоем мушиного клея (канифоль с касторовым маслом). Весь завод ставят в термостат с температурой 24 - 28° весной и летом и 21 - 24° зимой.

Выборку клещей для различных опытов из завода во влажные камеры можно производить: 1) счесывая клещей со спины живой мыши; 2) обычным способом - осматривая убитую мышь, собирая и счесывая с нее клещей; 3) снимая клещей со стенок банки влажной кисточкой; 4) разобрав фанерные ящички и снимая клещей с их стенок кисточкой или листочком фильтровальной бумаги; 5) помещая кусок ваты или подстилки из банки в мешочек и тщательно выбирая из мешочка всех клещей, выдержанных контрольный срок (до 7 дней).

Для выяснения возможности заражения клещей при кровососании, их способности передавать возбудителя заболевания через укус, способности длительно сохранять возбудителя, передавать его трансовариально нужно в эксперименте иметь клещей одного возраста. Для этого выбирают напитавшихся самок (наиболее крупные клещи) и выдерживают их во влажных камерах, по 25 - 30 особей в каждой, в течение 3 - 8 дней при температуре 24 - 28° (до полного переваривания крови). Самок кормят под стеклянным цилиндром, приклеенным к экспериментальному животному менделеевской замазкой¹ или замазкой Кригера, а сверху закрытым ватной пробкой, обернутой марлей. Затем их рассаживают по 10 экз. во влажные камеры. При температуре 24 - 28° развитие идет быстро: из отложенных яиц и отродившихся личинок на 3 - 6-й день после кормления самок появляются протонимфы. Нимф и самок вместе снова кормят на животных, затем разделяют и помещают в камеры (нимф по 20 - 25 экз., самок - по 10). Для превращения нимф в самок требуется повторное кормление (самцы появляются в партии раньше, после первого кормления).

¹(Коллодием приклеивать не рекомендуется, так как пары эфира и ацетона оказывают вредное действие на клещей.)

Для кормления паразитических клещей пользуются несколькими методами.

1. Кормление клещей на подопытных животных под матерчатыми наклейками, применяемыми для кормления иксодовых или аргасовых клещей (Сердюкова, 1940; Поспелова-Штром, 1941).

2. Кормление клещей под стеклянным цилиндром, открытым с обоих концов (Нельзина, 1951). Экспериментальное животное (белые мыши, белые или серые крысята) привязывают на станок брюхом кверху, после чего ему выстригают шерсть. Затем на участок оголенной кожи коллодием приклеивают стеклянный цилиндр, верхний край которого обмазывают вазелином (предосторожность против расползания клещей). Пробирку с клещами помещают в черную кювету (чтобы бледно окрашенные клещи были лучше заметны), края которой также смазывают вазелином. Открывают ватную пробку и влажной кисточкой пересаживают клещей на животное, внутрь цилиндра, сначала снимая клещей с пробки, затем выползающих из пробирки.

Напившиеся клещи ползут вверх по цилиндру; здесь их собирают кисточкой и переносят в новые пробирки. Если в пробирку требуется поместить большое количество клещей, ее перевертывают вверх дном и клещей подсаживают снизу.

3. Кормление клещей в стеклянном сосуде, в который помещают подопытное животное и голодных клещей. В некоторых случаях вместо стеклянного сосуда можно использовать мешочек из плотной белой материи; таким образом можно накормить куриных клещей, оставив их в плотно завязанном мешочке вместе с цыпленком на ночь, или паразитов ящериц (Sauronyssus saurarum Oudms.), поместив их вместе с хозяином.

Для того чтобы заставить клещей быстрее присосаться к хозяину, на кожу последнего наносится легкая царапина.